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沪杏光学-显微镜检技术（2） |
| 文章来源： 发布时间：2014/10/22 10:20:30 |
显微镜成像光路系统的调整，是根据不同显微镜检术的需要而进行的。
所谓显微镜检术（microscopy），概括而言就是以显微镜观察样品时所使用的照明方法，以及如何使样品所成的像能获得更良好反差的技术与方法。以下简述显微镜检术中已成熟的几种方法及对应的显微镜成像光路系统的调整方法
3、透射光相差法：
这是现代显微镜检术中的一种反差增强法。基本部件：相差物镜、明视野与相差兼用的多用途聚光镜、对中望远镜、绿色滤光片。
调整方法：
a. 在库勒照明系统调整好的基础上，用明视野方法把样品调焦清晰；
b. 把聚光镜转到Ph1对准转盘刻度线位置，选用10×相差物镜，换上待观察的透明样品；
c. 拔掉其中一个目镜，换上对中望远镜，并调焦于视野中的两个相差环上（物镜的黑色相差环和聚光镜的透光相差环）；
d. 视野中的两个相差环不一定重合，调节聚光镜上的两个调节装置（调整相差环左右位置的调节杆和调整前后位置的摩擦式转钮），使透光环作前后左右移动而与黑环重合；
e. 调整好后，换回观察用目镜，将绿色滤光片按入光路中，即可观察到样品的相差像；
f. 有20×和40×物镜观察时，聚光镜应设在Ph2位置上，用100物镜时，聚光镜应设在Ph3位置上。
适用范围：适用于观察透明、未染色或不能染色的样品，如各种细胞、活组织、未染色或不染色的组织切片、水生生物等。
本文由|沪杏倒置显微镜 http://www.shhx17.com/shhx17/com_pro.asp?sid=17&bid=13 整理提供
4、微分干涉相衬法：
为了克服相差法观察时样品细节像周围伴随有光晕，会掩没掉本来应该看见的细节，以及样品或组织切片厚度要求相当薄，原则上下能厚于10?m等局限性，利用双光束干涉的原理设计子微分干涉相衬法。
调整方法：
a. 必须在库勒明系统已调好的基础上才能调好DIC方法；
b. 先用10×物镜，以明视野先确定好能把样品看清晰的物镜调焦位置；
c. 把起偏器（polarizer）摆入照明光路中，注意其取向应为东—西方向；
d. 把聚光镜转盘转到与10×物镜对应使用的位置上，即DIC 0.3—0.4；
e. 在物镜后方或物镜转换器上插入10×物镜使用的DIC插片（DIC slider）；
f. 把检偏器（analyser）插入成像光路中，注意其取向应为南—北方；
g. 换上待观察的透明样品，开亮光源把样品调焦清晰；
h. 调节DIC插片，使微分干涉相衬的像达到最佳效果，也就是浮雕效果最为明显；
i. 同时可调节聚光镜的孔径光阑，使反差的效果也达到最佳；
j. 然后再细微调样品的细节，可见样品中不同层面上的结构；
k. 如果把补色器（first order red retardation plate）插入，并同时调节DIC插片，可在视野中看到不断变化的绚丽色彩，红、橙、黄、绿、蓝、紫、粉红、粉紫及金黄色都具有。适用范围：透明或不能染色的组织切片，厚度可达100?m左右，培养中的活组织和活细胞、小生生物等。
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